影响蛋白与硝酸纤维素膜结合的四个主要方面是：

1、用于溶解捕获试剂的缓冲液

2、膜本身生物通 www.ebiotrade.com

3、捕获试剂本身

4、蛋白结合时的周围环境（主要指湿度）生物通 www.ebiotrade.com

缓冲液的使用

合适的缓冲液必需能够溶解捕获蛋白以达到应用所需浓度，并能保持稳定（换言之，即溶解蛋白并维持其结合能力）。要获得的结合意味着创造利于蛋白分散于固相的条件。随着捕获蛋白不同，蛋白与膜结合的优化条件也有所不同。缓冲液中捕获线的使用必需要求溶解其中的蛋白达到合适的浓度。如果浓度过低，将无法在捕获线处捕获足够的蛋白。蛋白若形成沉淀，将阻碍膜上的孔隙从而导致样品经过测试条的测试区域时出现不规则的流动。沉淀也可能阻塞仪器管道和孔洞从而损坏仪器装置。尽管去稳定剂和共沉淀剂可利于蛋白在固相表面的分布，但必需在一开始就找到合适的蛋白溶剂。pH值和离子浓度是需要进行优化的两个重要参数。生物通 www.ebiotrade.com

pH水平

缓冲液中pH水平在很大程度上会影响蛋白与膜的结合。由于NC膜无酸性质子，因此调节pH时仅仅能改变的是蛋白的性质。蛋白质的溶解度在其等电点（pI）时最小。过大或过小的pH值可使蛋白发生变性，使其结合特性发生巨大改变，甚至产生聚集及析出沉淀。综上原则，在探索使蛋白溶液能在固相中理想分布的条件时，对于检测线最理想的缓冲液条件是其pH值等于或接近pI的时候。生物通 www.ebiotrade.com

常用的缓冲系统有磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐和Tris盐缓冲液。值得注意的是，侧向流检测应用时捕获分子在膜上需被干燥，这意味着缓冲液所有组分，除可挥发成分外，都需在膜上干燥。这就使得可挥发的缓冲液如醋酸铵或碳酸铵特别受青睐。但高浓度的伯铵（例如来自Tris缓冲液）可导致捕获蛋白中酸性氨基酸残基（谷氨酸、天冬氨酸）与缓冲离子氨基间形成盐桥，从而遮盖住结合位点。

离子浓度生物通 www.ebiotrade.com

电解质溶液中离子的解离可降低蛋白-蛋白之间的相互作用力，因此在特定离子浓度范围内溶液中蛋白溶解度显著增强（盐溶效应）。而过高离子强度则相反（盐析效应）。这是因为此时大量的溶解离子占据越来越多的水分子，导致蛋白分子周围溶解层塌陷，蛋白分子相互作用，从而形成聚集和沉淀。根据这一原则，蛋白应在应用缓冲液中进行溶解，同时还应使其保持在利于膜固相分布的环境中。利用盐析效应可以合理的降低溶液中分子的稳定性。然而，某些盐如硫酸铵能使蛋白溶液稳定化降低，控制的难度也有所上升。盐浓度的小的变化（如蒸发导致的）会严重影响沉淀的程度。除此之外，使用这些类型的缓冲液干燥后还会将大量的盐引进膜系统中，从而严重干扰整个测试。众的意见是使缓冲液中的离子强度尽可能地低，以减少盐溶效应。缓冲盐（PBS,TBS）通常不被推荐。